Os gerentes de fabricação responsáveis pela planta de processamento downstream de peptídeos sintéticos ou recombinantes sabem muito bem que a CIP de uma coluna de cromatografia empacotada é um "mal necessário" para prolongar a vida útil do leito. Embora a CIP seja uma etapa que se queira evitar o máximo possível, ela também é uma prática economicamente importante que pode reduzir o custo de fabricação do seu API.
Considerações sobre a realização de CIP em colunas embaladas com sílica gel de fase ligada
A primeira e principal consideração é o agente CIP - qual produto químico usar. É claro que um produto químico mais suave, com pH mais próximo do neutro, é sempre preferível. No entanto, os agentes suaves geralmente não serão eficazes para remover contaminantes que estejam firmemente ligados à sua fase ligada. A lavagem com solvente orgânico também pode ser útil para remover certas espécies hidrofóbicas, mas o solvente sozinho não resultará em uma CIP profunda da coluna.
Se as opções de produtos químicos "suaves" e de solventes "simples" não conseguirem fazer a limpeza adequada e restaurar o desempenho da coluna, o último recurso geralmente é a solução aquosa de NaOH na presença de solvente orgânico.
Para a CIP baseada em NaOH, recomendamos o seguinte:
- Use a menor concentração possível de NaOH que ainda faça uma limpeza adequada. Concentrações mais altas de NaOH reduzirão mais rapidamente o tempo de retenção de sua coluna devido à perda de ligantes ligados
Tempo de retenção para naftaleno
Efeito de diferentes concentrações de NaOH na rapidez com que o tempo de retenção da coluna diminui devido à perda de ligantes ligados.
- Execute o CIP de NaOH com a menor frequência possível e, ao mesmo tempo, restaure o desempenho da coluna
- Da mesma forma, só inicie a primeira CIP cáustica após a execução do maior número possível de ciclos de purificação, mantendo o desempenho aceitável da coluna. Pode não haver necessidade de executar a CIP inicial até depois do ciclo de purificação número cinco (ou até o ciclo dez, se o POP exigir a CIP a cada cinco ciclos)
- Não baseie seu método CIP no volume de solução de NaOH que pretende passar na coluna; em vez disso, baseie a limpeza no tempo de contato da sílica com a solução de NaOH
- Após a CIP com NaOH, neutralize IMEDIATAMENTE a coluna lavando o leito com uma solução de pH adequadamente ácido
- Execute a etapa CIP no modo de retrolavagem/fluxo reverso!
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