Los directores de fabricación encargados de la planta de procesamiento posterior de péptidos sintéticos o recombinantes saben muy bien que la limpieza en el lugar (CIP) de una columna de cromatografía empaquetada es un "mal necesario" para prolongar la vida útil del lecho. Aunque el CIP es un paso que se quiere evitar en la medida de lo posible, también es una práctica económicamente importante que puede reducir el coste de fabricación de su API.
Consideraciones para realizar el CIP en columnas empacadas con un gel de sílice de fase enlazada
La primera y principal consideración es el agente CIP: qué producto químico utilizar. Por supuesto, siempre es preferible un producto químico más suave con un pH más cercano al neutro. Sin embargo, los agentes suaves no suelen ser eficaces para eliminar los contaminantes que están fuertemente unidos a su fase de enlace. El lavado con disolvente orgánico también puede ser útil para eliminar ciertas especies hidrofóbicas, pero el disolvente por sí solo no dará lugar a una limpieza en profundidad de la columna.
Si las opciones de productos químicos "suaves" y de "simple" disolvente no logran una limpieza adecuada y el restablecimiento del rendimiento de la columna, el último recurso suele ser la solución acuosa de NaOH en presencia de disolvente orgánico.
Para el CIP a base de NaOH, recomendamos lo siguiente:
- Utilice una concentración de NaOH lo más baja posible que siga realizando una limpieza adecuada. Las concentraciones de NaOH más altas reducirán más rápidamente el tiempo de retención de su columna debido a la pérdida de ligandos enlazados
Tiempo de retención del naftaleno
Efecto de diferentes concentraciones de NaOH en la rapidez con la que el tiempo de retención de la columna se acorta debido a la pérdida de ligandos enlazados.
- Ejecutar el CIP de NaOH con la menor frecuencia posible mientras se restablece el rendimiento de la columna
- Del mismo modo, sólo inicie la primera CIP cáustica después de que se hayan ejecutado tantos ciclos de purificación mientras se mantenga un rendimiento aceptable de la columna. Es posible que no sea necesario realizar la CIP inicial hasta después del quinto ciclo de purificación (o incluso hasta el décimo ciclo si su SOP exige una CIP cada cinco ciclos).
- No base su método CIP en el volumen de solución de NaOH que pretende pasar por la columna; en su lugar, base la limpieza en el tiempo de contacto de la sílice con la solución de NaOH
- Después del CIP con NaOH, neutralizar INMEDIATAMENTE la columna lavando el lecho con una solución de pH adecuadamente ácida
- Realice el paso de CIP en el modo de flujo inverso/lavado a contracorriente.
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